細(xì)胞工廠有望為生物燃料打開(kāi)一條綠色通道。

近日，諾和諾德基金會(huì)生物可持續(xù)性研究中心與美國(guó)耶魯大學(xué)在《自然—通訊》發(fā)布的一項(xiàng)研究表明，甘蔗在進(jìn)行乙醇發(fā)酵時(shí)，淀粉乳桿菌能產(chǎn)生大量喂養(yǎng)酵母菌的乙醛，發(fā)酵產(chǎn)量預(yù)計(jì)可提高3%。研究人員建議，關(guān)注微生物群落的多樣性，對(duì)益生菌和有害細(xì)菌進(jìn)行取舍，可以提高發(fā)酵的總產(chǎn)量和成本。

在中國(guó)科學(xué)院微生物研究所研究員張延平看來(lái)，微生物細(xì)胞工廠是生物煉制的核心，利用代謝工程與合成生物學(xué)技術(shù)創(chuàng)建高效的微生物細(xì)胞工廠，已經(jīng)展現(xiàn)出良好的應(yīng)用前景和巨大的市場(chǎng)潛力。

不過(guò)，她在接受《中國(guó)科學(xué)報(bào)》采訪時(shí)坦言，“雖然高效利用微生物可以提高生物燃料產(chǎn)量，但由于生產(chǎn)成本高及補(bǔ)貼等優(yōu)惠政策的變化，很多企業(yè)對(duì)技術(shù)研發(fā)持續(xù)投入的熱情并不高。”

細(xì)胞工廠前景凸顯

“由于化石能源具有不可再生性及不合理使用會(huì)造成環(huán)境污染等特性，各國(guó)都在積極尋找可替代資源，其中生物質(zhì)最具潛力。”中國(guó)科學(xué)院過(guò)程工程研究所研究員王嵐說(shuō)，“生物質(zhì)在地球上儲(chǔ)量巨大，可以通過(guò)化學(xué)、生物等方法轉(zhuǎn)化為燃料，這種生物燃料清潔無(wú)污染，在可再生能源中占據(jù)重要地位。”

據(jù)她介紹，生物燃料主要分為醇類(lèi)燃料、發(fā)電、柴油和成型燃料四大類(lèi)。醇類(lèi)燃料中，燃料乙醇是最具代表性的生物質(zhì)產(chǎn)品。

在《自然—通訊》發(fā)表的這項(xiàng)研究中，研究人員仔細(xì)研究了甘蔗在進(jìn)行乙醇發(fā)酵時(shí)，酵母菌和其他細(xì)菌的相互作用，并對(duì)微生物群落結(jié)構(gòu)的所有可能組合進(jìn)行了重構(gòu)，這涵蓋了工業(yè)生產(chǎn)中約80%的微生物群落多樣性，其中淀粉乳桿菌特別值得關(guān)注。

“這種細(xì)菌幾乎可充當(dāng)益生菌，阻止有害細(xì)菌參與發(fā)酵過(guò)程。它以一種和酵母幾乎共生的方式生長(zhǎng)，這對(duì)工業(yè)生產(chǎn)十分有益。”曾在諾和諾德生物可持續(xù)性研究中心攻讀博士學(xué)位的馬薩·利諾說(shuō)。

近年來(lái)，張延平將目光轉(zhuǎn)向了燃料丁醇。“由于燃燒熱值和腐蝕性問(wèn)題，燃料乙醇在汽油中添加量超過(guò)15%時(shí)，必須添加腐蝕抑制劑或?qū)Πl(fā)動(dòng)機(jī)進(jìn)行改造。我國(guó)現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)是乙醇汽油中乙醇含量為10%左右。相比而言，丁醇在性能上與汽油更為接近，燃料丁醇可以100%用作車(chē)用燃油。”

為了獲得高產(chǎn)丁醇細(xì)胞工廠，張延平團(tuán)隊(duì)以大宗有機(jī)溶劑和潛在生物燃料——正丁醇為目標(biāo)產(chǎn)品，以大腸桿菌為底盤(pán)細(xì)胞，創(chuàng)建全染色體編輯的丁醇細(xì)胞工廠。經(jīng)過(guò)這種策略獲得的丁醇高產(chǎn)菌株可以達(dá)到產(chǎn)丁醇大腸桿菌最高水平，葡萄糖的得率也達(dá)到理論最大值的83%，超越了天然產(chǎn)丁醇梭菌。

“該菌株生產(chǎn)丁醇不需要添加任何抗生素和誘導(dǎo)劑，具有工業(yè)化生產(chǎn)應(yīng)用的潛力，但由于原料成本高，產(chǎn)業(yè)化進(jìn)程仍然相對(duì)緩慢。”張延平表示。為此，她們進(jìn)一步開(kāi)發(fā)了同步高效代謝葡萄糖和木糖生產(chǎn)丁醇合成菌群，為進(jìn)一步開(kāi)發(fā)二代纖維素丁醇奠定了基礎(chǔ)。

改造微生物并非易事

“微生物菌種是制造生物燃料的核心，在漫長(zhǎng)的進(jìn)化過(guò)程中，微生物形成了非常精細(xì)的調(diào)控系統(tǒng)，想要改造它們并非易事。”張延平表示。

她告訴記者，微生物利用秸稈等生物質(zhì)為原料進(jìn)行生物轉(zhuǎn)化，需要對(duì)原料進(jìn)行預(yù)處理、水解等，轉(zhuǎn)化過(guò)程可能會(huì)產(chǎn)生很多雜質(zhì)，影響微生物的生長(zhǎng)和代謝;轉(zhuǎn)化得到的混合糖如果不能被同時(shí)利用，就會(huì)導(dǎo)致浪費(fèi)，提高成本;如果不能有效代謝，又會(huì)產(chǎn)生高營(yíng)養(yǎng)的廢水。

“因此，要想將秸稈等木質(zhì)纖維素原料轉(zhuǎn)化成所需的目標(biāo)產(chǎn)品，就需要將微生物的所有功能集成在一起，單靠某一種微生物是很難辦到的。”張延平團(tuán)隊(duì)為此也提出了一些新的技術(shù)理念，如合成微生物組，將分工合作的不同微生物結(jié)合在一起，共同完成一項(xiàng)工作。

作為生物質(zhì)煉制工程北京市重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室副主任，王嵐表示，首先，確定合適的酶靶點(diǎn)和代謝途徑進(jìn)行修飾或替換并不容易，某些基因的插入或刪除可能會(huì)影響菌株其他基因的表達(dá)。其次，與自然進(jìn)化的菌株相比，理性改造后的菌株可能還需要應(yīng)對(duì)菌株退化等問(wèn)題。

但王嵐指出，生物燃料的商業(yè)化不可避免地需要人造微生物，其性狀現(xiàn)已優(yōu)于野生型和某些工程菌株，能夠改善某些生物燃料的生產(chǎn)經(jīng)濟(jì)性。將遺傳和代謝工程與合成生物學(xué)和系統(tǒng)生物學(xué)相結(jié)合，是建立生產(chǎn)生物燃料的細(xì)胞工廠的關(guān)鍵。

張延平表示，在生物燃料生產(chǎn)過(guò)程中對(duì)微生物進(jìn)行改造，引入外源基因是必不可少的，但微生物在形成最終產(chǎn)品前會(huì)被分離，不會(huì)進(jìn)入產(chǎn)品，因此產(chǎn)品純度高且安全。“在菌株改造和生物燃料生產(chǎn)過(guò)程中還要注意盡量減少使用抗生素等可能對(duì)環(huán)境產(chǎn)生不利影響的物質(zhì)。”

經(jīng)濟(jì)性仍是挑戰(zhàn)

多年來(lái)，王嵐團(tuán)隊(duì)不斷嘗試將技術(shù)與市場(chǎng)接軌，她發(fā)現(xiàn)，在整個(gè)過(guò)程中，企業(yè)最關(guān)心的就是成本和利潤(rùn)。“我國(guó)在利用生物質(zhì)轉(zhuǎn)化醇類(lèi)燃料領(lǐng)域已達(dá)到世界先進(jìn)水平，擁有具有自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)的生物轉(zhuǎn)化乙醇及高附加值副產(chǎn)品技術(shù)，目前存在的主要問(wèn)題是工程性和經(jīng)濟(jì)性。”

張延平表示，目前我國(guó)燃料乙醇主要原料仍是玉米和甘蔗等，隨著玉米供需結(jié)構(gòu)的改變，未來(lái)以糧食為原料的燃料乙醇產(chǎn)業(yè)發(fā)展存在不確定性，因此，我國(guó)燃料乙醇產(chǎn)業(yè)正逐步從淀粉和糖類(lèi)乙醇，向2代纖維素燃料乙醇轉(zhuǎn)換。“一方面原料來(lái)源更廣，另一方面也維護(hù)了糧食安全”。

但她同時(shí)指出，我國(guó)2代纖維素燃料乙醇轉(zhuǎn)換技術(shù)與國(guó)外相比還存在一定差距，面臨原料收集難、生產(chǎn)成本高、受?chē)?guó)際石油價(jià)格波動(dòng)影響大等問(wèn)題。

為進(jìn)一步降低生產(chǎn)成本，王嵐在研究中發(fā)現(xiàn)，在生物燃料生產(chǎn)過(guò)程中融合化學(xué)催化和生物轉(zhuǎn)化，可以縮短反應(yīng)周期，提高效率。例如采用廉價(jià)的化學(xué)氧化劑復(fù)配于纖維素酶中進(jìn)行協(xié)同降解，有望同時(shí)降低底物氧化的用酶成本。

“隨著基因工程和代謝工程的發(fā)展，通過(guò)人工篩選、誘變、馴化和改造，增加微生物的功能、提高代謝能力，進(jìn)而提高產(chǎn)物的質(zhì)量和產(chǎn)量。”王嵐補(bǔ)充道。

激發(fā)內(nèi)生動(dòng)力

為推動(dòng)生物燃料市場(chǎng)化，國(guó)家出臺(tái)了一系列利好措施?！锻晟粕镔|(zhì)發(fā)電項(xiàng)目建設(shè)運(yùn)行的實(shí)施方案》就明確指出，在現(xiàn)有中央補(bǔ)貼資金的基礎(chǔ)上，自2021年起，新納入補(bǔ)貼范圍的項(xiàng)目補(bǔ)貼資金由中央和地方共同承擔(dān)。

在王嵐看來(lái)，國(guó)家補(bǔ)貼不是推動(dòng)生物燃料發(fā)展的長(zhǎng)久之計(jì)，還應(yīng)從根本上調(diào)動(dòng)企業(yè)、科研人員、農(nóng)戶(hù)等主體的內(nèi)生動(dòng)力，根據(jù)不同地區(qū)的生物質(zhì)特點(diǎn)設(shè)計(jì)適合的實(shí)施方案，降低其生產(chǎn)成本，從國(guó)家推動(dòng)轉(zhuǎn)為自發(fā)推動(dòng)。

為此，她建議進(jìn)一步降低生物燃料的市場(chǎng)準(zhǔn)入門(mén)檻，讓更多市場(chǎng)主體參與競(jìng)爭(zhēng)。此外，政策制定還應(yīng)適當(dāng)放寬，過(guò)細(xì)的政策可能會(huì)限制企業(yè)的發(fā)展和技術(shù)的更新。

張延平指出，生物燃料是一項(xiàng)涉及諸多不同研發(fā)方向的系統(tǒng)工程，而在此領(lǐng)域中，我國(guó)研究主體相對(duì)分散，技術(shù)集成存在一定難度，大多以科研項(xiàng)目為牽引。

對(duì)此，她建議，一方面科研人員要有“十年磨一劍”的研發(fā)精神，另一方面要整合現(xiàn)有資源，組建技術(shù)研發(fā)平臺(tái)，集中力量攻克生物燃料技術(shù)難題。此外，在合作中還應(yīng)明晰各方權(quán)責(zé)，加強(qiáng)知識(shí)產(chǎn)權(quán)保護(hù)。

對(duì)于生物燃料的發(fā)展，王嵐建議，要將工程概念引入工藝及設(shè)備開(kāi)發(fā)，除了產(chǎn)量外，還應(yīng)考慮能耗、水耗、投資成本、操作成本、安全性等指標(biāo)，綜合評(píng)價(jià)工藝;其次要對(duì)整個(gè)系統(tǒng)進(jìn)行設(shè)計(jì)，實(shí)現(xiàn)全局最優(yōu)化。此外，生物燃料行業(yè)一定要注重增加產(chǎn)品附加值、延伸產(chǎn)業(yè)鏈，以增加企業(yè)利潤(rùn)，未來(lái)生物質(zhì)能梯級(jí)綜合利用將是主要發(fā)展方向。